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過氧化氫酶的活性測定

過氧化氫酶的活性測定分為化學測定法和光度法兩種:

一、化學測定法:高錳酸鉀滴定法,碘量法。

二、光度法:紫外分光光度法,熒光分析法,化學發光法。 電化學法:極譜氧電極法,電流測定法,電泳一染色法。 放射化學測定法。 簡易氣量測定法。

具體測定如下:

高錳酸鉀滴定法: 過氧化氫酶(CAT)屬于血紅蛋白酶,含有鐵,它能催化過氧 化氫分解為水和分子氧,在此過程中起傳遞電子的作用,過氧 化氫則既是氧化劑又是還原劑。 據此,可根據H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。 在反應系統中加入一定量(反應過量)的H2O2溶液,經酶促反 應后,用標準高錳酸鉀溶液(在酸性條件下)滴定多余的H2O2 。  即可求出消耗的H2O2的量。  酶活性用每克鮮重樣品1min內分解H2O2的毫克數 表示: 酶活(mgH2O2/gFW·min)= 式中 A—對照KMnO4滴定毫升數; B—酶反應后KMnO4滴定毫升數; VT—酶液總量(ml); V1—反應所用酶液量(ml); W—樣品鮮重(g); 1.7—1ml 0.1mol/L的KMnO4相當于 1.7mg H2O2。 

紫外分光光度法: H2O2在240nm波長下有強烈吸收,過氧化氫酶能分解過氧 化氫,使反應溶液吸光度(A240)隨反應時間而降低。根據 測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。 以1min內A240減少0.1的酶量為1個酶活單位(u)。 過氧化氫酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0- AS0—加入煮死酶液的對照管吸光值; AS1, AS2—樣品管吸光值; Vt—粗酶提取液總體積(ml); V1—測定用粗酶液體積(ml); FW—樣品鮮重(g); 0.1—A240每下降0.1為1個酶活單位(u); t—加過氧化氫到最后一次讀數時間(min)。 

方法比較: 研究認為,化學滴定法重復性差、緊密度 低、操作繁瑣、檢測線低,不適于大批量 的樣品測定。其優點是不需要任何特殊的 儀器,適用性比較廣泛。 紫外分光光度法具有重現性好,操作簡單、 快速、檢測線相對較低得到優點。但是對 于測定底物或產物改變量方面不太準確。

過氧化氫酶的活性測定總結:

綜上所述,過氧化氫酶活性測定的方法大都基于 過氧化氫酶催化過氧化氫的分解反應:根據反應 生成的氧氣的量、反應剩余的過氧化氫的量或根 據反應時的電子的轉移及電流的變化等。同時, 影響測定結果的因素很多,如過氧化氫的濃度、 酸度、溫度及重金屬的含量等;并且各種方法的 準確性和靈敏度也有一定差異。因此,在測定CAT 活性時,應該根據具體組織種類及測量要求選擇 適合的測定的方法。

酶制劑

因酶制劑產品眾多,如:過氧化氫酶 粉末、α-葡萄糖苷酶、膽固醇酯酶 、尿酸酶、輔酶A、抑肽酶、胰凝乳蛋白酶、乙酰膽堿酯酶、彈性蛋白酶、膽固醇氧化酶 、超氧化物歧化酶、腸激酶、膽紅素氧化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、凝血酶、心肌黃酶、磷酸葡萄糖變位酶、己糖激酶、辣根過氧化物酶、葡萄糖 -6-磷酸脫氫酶、腺苷脫氨酶、核糖核酸酶、黃嘌呤氧化酶、溶菌酶等,詳情進入酶制劑產品頁

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